Różnorodny zakres ostatecznych chemicznych czynników rakotwórczych hamował przenoszenie grup metylowych z S-adenozylometioniny do hemimetylowanego DNA w reakcji katalizowanej przez metylotransferazę śledziony myszy. Tworzenie się miejsc nietrwałych w środowisku zasadowym w DNA zmniejszyło jego zdolność do akceptowania grup metylowych in vitro, ale reakcja metylacji była znacznie mniej wrażliwa na dimery tyminy   lub pęknięcia dwuniciowe . Substancje rakotwórcze indukowały powstawanie uszkodzeń DNA nietrwałych w środowisku zasadowym, ale obserwowany stopień hamowania metylotransferazy był wyższy niż oczekiwany dla samego…

Wirusowe biblioteki metagenomiczne są obiecującym, ale wcześniej niewykorzystanym źródłem nowych enzymów odczynnikowych. Głębokie sekwencjonowanie i funkcjonalne badanie przesiewowe wirusowego metagenomicznego DNA z blisko wrzącej puli termicznej pozwoliło zidentyfikować klony wyrażające aktywność termostabilnej polimerazy DNA (Pol). Wśród nich 3173 Pol wykazywał zarówno wysoką termostabilność, jak i wrodzoną aktywność odwrotnej transkryptazy (RT). Opisujemy biochemię 3173 Pol i opisujemy jego zastosowanie w jednoenzymowej reakcji PCR z odwrotną transkrypcją (RT-PCR). 3173 Pol typu dzikiego zawiera korektorską domenę…

Zaprojektowano system ekspresyjny (pSKGFP), który umożliwia ekspresję jednołańcuchowych fragmentów zmiennych jako białek fuzyjnych ze zmodyfikowanymi białkami zielonej fluorescencji. Ten system ekspresyjny jest porównywalny z często stosowanymi wektorami do prezentacji fagowej i umożliwia jednoetapową charakteryzację wybranych rekombinowanych przeciwciał za pomocą cytometrii przepływowej lub barwienia fluorescencyjnego komórek. Dwa różne jednołańcuchowe przeciwciała z fragmentami zmiennymi, oba skierowane przeciwko lipopolisacharydom bakterii Ralstonia solanacearum, poddano fuzji genetycznej z przesuniętym w kierunku czerwieni zielonym białkiem fluorescencyjnym, a…

Peptyd C jest markerem wydzielania insuliny  u pacjentów z cukrzycą. Oceniliśmy wewnątrz- i międzylaboratoryjną nieprecyzyjność oznaczeń peptydu C i ustaliliśmy, czy  kalibratory surowicy  z wartościami przypisanymi przez spektrometrię mas mogą być użyte do harmonizacji wyników dla peptydu C. Wysłaliśmy 40 różnych próbek surowicy do 15 laboratoriów, które stosowały 9 różnych rutynowych metod oznaczania peptydu C. Wysłaliśmy również dopasowane próbki osocza do innego laboratorium w celu analizy peptydu C przy użyciu referencyjnej metody spektrometrii masowej. Każde laboratorium analizowało…

Cukrzyca typu 2 jest postępującym i złożonym schorzeniem, które trudno skutecznie leczyć w dłuższej perspektywie. Większość pacjentów ma nadwagę lub otyłość w momencie rozpoznania i bez doustnych leków przeciwcukrzycowych nie będzie w stanie osiągnąć lub utrzymać prawie normoglikemii; znaczna część pacjentów będzie ostatecznie wymagać insulinoterapii w celu utrzymania długoterminowej kontroli glikemii, w monoterapii lub w połączeniu z doustną terapią przeciwcukrzycową. Uważa się, że częsta potrzeba eskalacji terapii odzwierciedla postępującą utratę funkcji komórek…

Konformacyjne warianty unikalnej rodziny inhibitorów proteaz, określane jako SERPIN, są najczęściej niedostatecznie reprezentowane w analizach proteomicznych. Ogranicza to zrozumienie złożonej regulacji, jaką ta rodzina białek przedstawia sieciom w sieci interakcji proteaz. Używając separacji opartej na kulkach, zapewnianej przez rodzinę produktów wzbogacania proteomicznego, w szczególności  AlbuVoid ™ i AlbuSorb, demonstrujemy ich użyteczność w badaniach nad SERPINami w surowicy . Sugerujemy również ich zastosowanie do opracowania profili funkcjonalnych proteoform SERPIN oraz sposobu, w jaki mogą one ustalić…

DNA telomerów – końcowych kompleksów DNA-białko chromosomów – różni się wyraźnie od innych sekwencji DNA zarówno pod względem struktury, jak i funkcji. Ostatnie prace zwróciły uwagę na jego niezwykły sposób syntezy przez rybonukleoproteinową odwrotną  transkryptazę,  telomerazę , a także na jego zdolność do tworzenia niezwykłych struktur in vitro. Ponadto wykazano, że synteza telomerów przez  telomerazę  ma zasadnicze znaczenie dla utrzymania telomerów i długoterminowej żywotności.  Katalityczne homologi podjednostek telomerazy z rozszczepionych drożdży i człowieka. Katalityczne podjednostki białkowe  telomerazy  z orzęsków Euplotes aediculatus…

Badano udział stanu metabolicznego ludzkich erytrocytów w utrzymaniu odkształcalności komórek podczas i po inkubacji in vitro w surowicy przez okres do 28 godzin. Początkowa utrata odkształcalności błony stała się widoczna między 4 a 6 godziną, gdy poziomy komórkowe trifosforanu adenozyny  (ATP) wynosiły około 70% wartości początkowych. Odkształcalność błony pozostawała następnie stabilna między 6 a 10 godzinami. Po 10 godz., gdy komórkowe ATP spadło do < 15% wartości początkowych, postępujące równoległe zmiany w wapniu krwinek…

Choroby zębów należą do najbardziej rozpowszechnionych i kosztownych chorób dotykających społeczeństwa uprzemysłowione, a mimo to można im bardzo zapobiegać. Mikroflora biofilmów płytki nazębnej z obszarów dotkniętych chorobą różni się od tej występującej w zdrowiu, chociaż domniemane patogeny często można wykryć w niewielkiej liczbie w normalnych miejscach. W przypadku próchnicy następuje przesunięcie w kierunku dominacji środowiskowej bakterii Gram-dodatnich i kwasogennych (np. mutans streptococci i lactobacilli) kosztem gatunków wrażliwych na kwasy związanych ze…

Acetylocholina jest niezbędnym neuroprzekaźnikiem występującym w całym układzie nerwowym. Jego działanie na receptory postsynaptyczne jest regulowane poprzez hydrolizę przez różne karboksyloesterazy, zwłaszcza cholinoesterazy (ChEs). Ostra toksyczność związków fosforoorganicznych (OP) jest bezpośrednio związana z ich działaniem jako inhibitorów ChE. Jednym szeroko stosowanym testem do oceny aktywności ChE jest metoda spektrofotometryczna opracowana przez Ellmana i in. Gdy źródło enzymu pochodzi z tkanek lub, w szczególności, krwi, hemoglobina wykazuje pik spektrofotometryczny przy tej samej długości fali stosowanej…