Ocena obróbki HemogloBind do przygotowania próbek do analizy cholinesterazy.

    1. Acetylocholina jest niezbędnym neuroprzekaźnikiem występującym w całym układzie nerwowym. Jego działanie na receptory postsynaptyczne jest regulowane poprzez hydrolizę przez różne karboksyloesterazy, zwłaszcza cholinoesterazy (ChEs). Ostra toksyczność związków fosforoorganicznych (OP) jest bezpośrednio związana z ich działaniem jako inhibitorów ChE. Jednym szeroko stosowanym testem do oceny aktywności ChE jest metoda spektrofotometryczna opracowana przez Ellmana i in. Gdy źródło enzymu pochodzi z tkanek lub, w szczególności, krwi, hemoglobina wykazuje pik spektrofotometryczny przy tej samej długości fali stosowanej do analizy aktywności cholinergicznej.
    2. Stwarza to istotne tło, które zakłóca test Ellmana i należy je przezwyciężyć, aby dokładnie monitorować aktywność cholinesterazy. Tutaj bezpośrednio porównujemy metody przetwarzania krwi: metodę klasyczną (1,67 ± 0,30 U/mL) i HemogloBind (1,51 ± 0,17 U/mL) i wyraźnie pokazujemy, że wstępne traktowanie próbek krwi Hemoglobindem  jest zarówno wystarczającą, jak i szybką metodą przygotowania próbki do oceny aktywności ChE metodą Ellmana.

    Nowatorska metodologia analizy subproteomów błonowych i cytozolowych erytrocytów metodą 2-DE.

    • W celu zbadania szerokiej kohorty próbek erytrocytów w warunkach klinicznych, proponujemy tutaj nowatorskie podejście, które pozwala na analizę zarówno ludzkich subproteomów cytozolowych, jak i błonowych.
    • Pomimo swojej prostej struktury, wysoka zawartość hemoglobiny obecnej w czerwonych krwinkach (RBC) sprawia, że ​​ich analiza proteomu jest niezwykle trudna. Badamy tutaj różne strategie izolacji frakcji błonowej i cytozolowej z erytrocytów oraz ich wpływ na profilowanie proteomu przez 2-DE, zwracając szczególną uwagę na usuwanie hemoglobiny.
    • Proste, szybkie i zadowalające podejście do deplecji hemoglobiny oparte na  odczynniku HemogloBind  zostało z powodzeniem zastosowane do komórek erytrocytów, umożliwiając analizę sub-proteomu cytozolowego za pomocą 2-DE bez większych zakłóceń.
    • W przypadku proteomu błonowego opisano tutaj nową połączoną strategię opartą na izolacji przez lizę hipotoniczną i dalszym oczyszczaniu na minikolumnach, umożliwiającą wykrywanie białek o dużej masie cząsteczkowej (tj. spektryny, ankiryny) i dobrze rozdzielonych wzorów 2-DE.
    • Porcję frakcji błonowej również poddano trawieniu w roztworze i analizowano za pomocą nano-LC sprzężonego ze spektrometrem masowym LTQ-Orbitrap. Dzięki temu podejściu zidentyfikowano w sumie 188 unikalnych białek. Badanie to stanowi podstawę dla przyszłych badań klinicznych, w których może być zaangażowana komórka erytrocytów.

    Charakterystyka białek błonowych i cytozolowych erytrocytów.

    • W celu zbadania szerokiej kohorty próbek erytrocytów w warunkach klinicznych, w tym rozdziale szczegółowo opisano nowatorskie podejście, które umożliwia analizę zarówno ludzkich podproteomów cytozolowych, jak i błonowych. Pomimo swojej prostej struktury, wysoka zawartość hemoglobiny obecnej w czerwonych krwinkach (RBC) sprawia, że ​​ich analiza proteomu jest niezwykle trudna.
    • Przeprowadzono dokładne badania różnych strategii izolacji frakcji błonowej i cytozolowej z erytrocytów oraz ich wpływu na profilowanie proteomu przez 2-DE, zwracając szczególną uwagę na usuwanie hemoglobiny.
    •  W rezultacie pokazano tutaj proste, szybkie i zadowalające podejście do ubytku hemoglobiny w komórkach erytrocytów, oparte na  odczynniku HemogloBind , w celu zadowalającej analizy sub-proteomu cytozolowego za pomocą 2-DE bez większych zakłóceń.
    • W przypadku proteomu błonowego opisano nową połączoną strategię opartą na izolacji przez lizę hipotoniczną i dalszym oczyszczaniu na minikolumnach, umożliwiającą wykrywanie białek o dużej masie cząsteczkowej (tj. spektryny, ankiryny) i dobrze rozdzielonych wzorów 2-DE. Analiza frakcji błonowej metodą nano-LC sprzężoną ze spektrometrem masowym LTQ-Orbitrap pozwala na identyfikację łącznie 188 unikalnych białek.

    Względna ocena ilościowa glikowanej Cu-Zn dysmutazy ponadtlenkowej w erytrocytach metodą spektrometrii masowej z jonizacją przez elektrorozpylanie.

    • Do względnej oceny ilościowej glikowanej Cu-Zn dysmutazy ponadtlenkowej (SOD-1) w ludzkich erytrocytach zastosowano spektrometrię mas z jonizacją przez elektrorozpylanie (ESIMS). Próbki SOD-1 przygotowano z erytrocytów przez usunięcie hemoglobiny przy użyciu  żelu z hemoglobiną  , a następnie ekstrakcję etanolem i chloroformem.
    • Powtarzalność pomiaru względnej zawartości procentowej białka glikowanego była dobra, a odchylenie standardowe każdego pomiaru wynosiło 4,0%. Na podstawie analizy widma masowego mieszaniny komercyjnego SOD-1 i in vitro częściowo glikowanej SOD-1 w kilku stosunkach stwierdzono, że wolny i glikowany SOD-1 mają taką samą wydajność jonizacji.
    • Odsetek glikacji na SOD-1 zmierzono u 30 osób, w tym pacjentów z cukrzycą. Poziomy glikacji wahały się od 4,5% do poniżej granicy wykrywalności.
    • Próbkę SOD-1 wyekstrahowaną z erytrocytów frakcjonowano metodą chromatografii Glyco-Gel B, a oddzielone frakcje analizowano metodą MS. Widma mas zaabsorbowanej frakcji wykazały znaczne ilości niespecyficznego wiązania białek nieglikowanych do Glyco-Gel B.

    Odstępy dawkowania i kontrola stężenia hemoglobiny u pacjentów z przewlekłą chorobą nerek i niedokrwistością leczonych epoetyną alfa lub darbepoetyną alfa: retrospektywne badanie kohortowe.

    1. Anemia jest częstym powikłaniem przewlekłej choroby nerek (PChN). Zatwierdzony odstęp między dawkami obecnie dostępnych środków stymulujących erytropoezę (ESA) wynosi 2 do 3 razy w tygodniu dla epoetyny alfa (EPO) i co 1 do 2 tygodni dla darbepoetyny alfa (DARB). Jednak ze względu na wygodę klinicyści czasami stosują rzadsze dawkowanie.
    2. W badaniu tym zbadano wzorce rzeczywistego stosowania ESA (dawki i odstępy między dawkami) oraz  kontrolę hemoglobiny (Hb) u dorosłych pacjentów ambulatoryjnych z PChN niewymagającą dializy w klinice anemii Cleveland Clinic Foundation. Zbadano również rozkład i zmienność poziomów Hb u tych pacjentów.
    3. Przejrzano karty kliniczne i dokumentację elektroniczną dorosłych pacjentów ambulatoryjnych z PChN, którzy rozpoczęli terapię ESA przed marcem 2005 r., w celu określenia początkowych, dominujących (stosowanych przez najdłuższy z rzędu okres) i końcowych odstępów między dawkami oraz średnich tygodniowych dawek EPO i DARB. Kontrolę Hb badano pod kątem odchyleń maksymalnych >12 g/dl i <11 g/dl oraz proporcji pomiarów poza tymi wartościami.
    4. W analizie uwzględniono dane od 111 pacjentów ambulatoryjnych (średnia wieku [SD] 65,9 [14,4] lat; 53,2% mężczyzn; 66,7% rasy białej, 29,7% rasy czarnej, 2,7% innych osób, 0,9% nieznanego pochodzenia etnicznego). Dwudziestu jeden pacjentów otrzymało tylko EPO, 74 tylko DARB, a 16 wymieniono ESA. Średni czas obserwacji wyniósł 20,5 miesiąca. Najczęstszymi początkowymi przerwami w dawkowaniu były qwk dla EPO (66,7%) i q2wk dla DARB (90,5%). Dominujące odstępy między dawkami wynosiły co 2 tygodnie u 61,9% pacjentów z EPO i co 3 tygodnie u 62,3% pacjentów z DARB. Jednak 80,0% osób, które otrzymały EPO q2wk i 63,2% osób, które otrzymały DARB q3wk, ostatecznie powróciło do swoich początkowych przerw w dawkowaniu. Największy odsetek pomiarów Hb <11 g/dl wystąpił przy dominujących odstępach dawkowania qwk dla EPO i q2wk dla DARB (oba 46,0%; odpowiednio 11 i 26 pacjentów), podczas gdy największy odsetek pomiarów >
    5. Wzorce stosowania ESA u dorosłych pacjentów ambulatoryjnych z przewlekłą chorobą nerek w tym ośrodku wskazywały, że klinicyści wydłużyli odstępy między dawkami poza te, które podano w zatwierdzonych informacjach na temat przepisywania leków. Jednak podczas leczenia podtrzymującego podawanego w wydłużonych odstępach między kolejnymi dawkami wystąpiły różnice w stężeniach Hb, co spowodowało u większości pacjentów wznowienie stosowania krótszych odstępów między kolejnymi dawkami.
    Analiza porównawcza metabolicznych czynników ryzyka progresji niealkoholowej stłuszczeniowej choroby wątroby
    Niealkoholowa stłuszczeniowa choroba wątroby (NAFLD), dominująca na całym świecie przewlekła choroba wątroby, odnosi się do spektrum chorób od łagodnego stłuszczenia do stłuszczeniowego zapalenia wątroby powodującego zwłóknienie bez znacznego spożycia alkoholu. Do głównych czynników ryzyka (RF) należą otyłość, cukrzyca typu 2 i dyslipidemia. Obecnie nie istnieje ustalona hierarchia wpływu metabolicznych RF na progresję NAFLD. W tym retrospektywnym badaniu kohortowym zbadano i uszeregowano niezależny i łączny wpływ trzech głównych RF na progresję NAFLD.
    652 pacjentów z NAFLD z ≥ 1 RF zostało sklasyfikowanych według kombinacji RF w celu zbadania rocznych zmian ciężkości RF z pomiarem sztywności wątroby (LSM) w ciągu pięciu lat. Omówiono wskaźnik masy ciała (BMI), hemoglo – bin A 1c  (HbA 1c ), cholesterol całkowity (TC) i LSM.
    U pacjentów z jakąkolwiek pojedynczą poprawą RF, spadki BMI były związane z roczną zmianą LSM o -1,26 kPa, podczas gdy spadki HbA 1c  i TC były związane ze zmianą odpowiednio -0,51 kPa i -0,56 kPa. U pacjentów z jakimkolwiek pojedynczym pogorszeniem RF wzrost BMI był skorelowany ze zmianą LSM o +0,74 kPa, a wzrosty HbA 1c  i TC były skorelowane ze zmianą odpowiednio o +0,43  kPa i +0,16 kPa.

    Colorimetric Substrate, 5ML

    C129-5ML Arbor Assays 5ML 268 EUR

    ST2 Antibody, 5ML

    C202-5ML Arbor Assays 5ML 268 EUR

    Streptavidin-Peroxidase , 5ML

    C203-5ML Arbor Assays 5ML 268 EUR

    Myeloperoxidase Conjugate, 5ML

    C224-5ML Arbor Assays 5ML 237 EUR

    Dissociation Reagent, 5ML

    X017-5ML Arbor Assays 5ML 122 EUR

    Stop Solution, 5ML

    X020-5ML Arbor Assays 5ML 65 EUR

    Dry DMSO, 5ML

    X022-5ML Arbor Assays 5ML 122 EUR

    Borohydride Buffer, 5ML

    X027-5ML Arbor Assays 5ML 122 EUR

    NADPH Diluent, 5ML

    X034-5ML Arbor Assays 5ML 87 EUR

    Dissociation Reagent, 5ML

    X058-5ML Arbor Assays 5ML 109 EUR

    Stop Solution, 5ML

    X134-5ML Arbor Assays 5ML 65 EUR

    Hydrogen Peroxide Reagent, 5ML

    C115-5ML Arbor Assays 5ML 123 EUR

    Fluorescent Detection Reagent, 5ML

    C116-5ML Arbor Assays 5ML 268 EUR

    Hydrogen Peroxide Reagent, 5ML

    C132-5ML Arbor Assays 5 ML 123 EUR

    Color Reagent A, 5ML

    X092-5ML Arbor Assays 5ML 109 EUR

    Color Reagent B, 5ML

    X093-5ML Arbor Assays 5ML 109 EUR

    DetectX® Formaldehyde Reagent, 5ML

    C002-5ML Arbor Assays 5ML 478 EUR

    DetectX® RBP Conjugate, 5ML

    C010-5ML Arbor Assays 5ML 237 EUR

    DetectX® Osteopontin Conjugate, 5ML

    C125-5ML Arbor Assays 5ML 237 EUR

    DetectX® Prolactin Conjugate, 5ML

    C138-5ML Arbor Assays 5ML 178 EUR

    DetectX® Insulin Conjugate, 5ML

    C186-5ML Arbor Assays 5ML 268 EUR

    DetectX® Cystatin C Conjugate, 5ML

    C034-5ML Arbor Assays 5ML 237 EUR

    5ML SELF STANDING SCREW-CAP TUBE,

    ST-5ML CORNING 500/pk 199 EUR

    DetectX® Endothelin-1 Conjugated Antibody, 5ML

    C159-5ML Arbor Assays 5ML 237 EUR

    5ML SELF STANDING SCREW-CAP TUBE WITH BLUE CAP, UNASSEMBLED

    SCT-5ML CORNING 500/pk 118 EUR

    HemogloBind™

    H0145-05 Biotech Support Group 5 mL 359 EUR

    HemogloBind™

    H0145-15 Biotech Support Group 15 mL 709 EUR

    HemogloBind™

    H0145-50 Biotech Support Group 50 mL 1420 EUR

    SingleStep Poly-HRP Anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, HRP-5ml

    Q2AB1-5ml EnQuireBio 5ml 131 EUR

    SingleStep Poly-HRP Anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, HRP-5ml

    Q2AB2-5ml EnQuireBio 5ml 131 EUR

    5ML SELF STANDING SCREW-CAP TUBE WITH BLUE CAP, UNASSEMBLED, PRE-STERILIZED

    SCT-5ML-S CORNING 25/pk 126 EUR

    HemogloBind™ Trial Kit

    HB145K-05 Biotech Support Group 420 EUR

    HemogloBind™ Nucleic Acid

    HN250-20 Biotech Support Group 20 preps 364 EUR

    HemogloBind™ Nucleic Acid

    HN250-200 Biotech Support Group 200 preps 1014 EUR

    NuGel-HemogloBind™ (Hemoglobin Removal) Kit

    NP-HO-T25 Biotech Support Group 25 preps 643 EUR

    NuGel-HemogloBind™ (Hemoglobin Removal) Kit

    NP-HO-T50 Biotech Support Group 50 preps 1176 EUR

    HemogloBind™ Blood Card Reagent Kit

    H0145BC-10 Biotech Support Group 10 preps 450 EUR

    HemogloBind™ Blood Card Reagent Kit

    H0145BC-50 Biotech Support Group 50 preps 1623 EUR

    Tube Holder for 5ml tubes (2 x 5ml)

    D1036-A5 Benchmark Scientific 1 PC 158.09 EUR

    5ml Tube holder

    D2400-R5 Benchmark Scientific 1 PC 742.73 EUR

    5ml Pipette Tips

    P7700-T5M Benchmark Scientific 1 PC 81.68 EUR

    COOLRACK XT 5ML HOLDS 12 X 5ML CENTRIFUGE TUBES

    432060 CORNING 1/pk 297 EUR

    Rabbit Complement UnadsoRabbited 5mL

    31060-2 Pel-Freez 5mL 83.49 EUR

    Rabbit Complement ADSORabbitED 5mL

    31063-2 Pel-Freez 5mL 119.38 EUR

    7077B PIPET SHRTY 5ML

    7077B-5 CORNING 200/pk 397 EUR

    7078B PIPET SHRTY 5ML

    7078B-5 CORNING 200/pk 380 EUR

    CORNING, SYRINGE TIPS, 5ML

    6624 CORNING 1/pk 77 EUR

    Fc Receptor Blocker, 5ml

    NB309-5S Innovex 5 ml 188 EUR

    5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, sterile, ten bags of 20 tubes

    C2520 MTC Bio 200/pack 80.38 EUR

    5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes

    C2500 MTC Bio 200/pack 76.66 EUR

    5mL MacroTube Starter Kit. Includes

    C2500-SK MTC Bio 1/pack 183.65 EUR

    Sterile 5mL Transport Tube (Axygen)

    TUBE5AX-S2 Next Advance 500box 223 EUR

    Sterile 5mL Centrifuge Tube (Eppendorf)

    TUBE5EP-S Next Advance 200box 155 EUR

    1-5ML SINGLE CHANNEL PIPETTOR

    AP-5000 CORNING 1/pk 200 EUR

    CORNING, SYRINGE TIPS, 5ML, STERILE

    6632 CORNING 1/pk 101 EUR

    Block for 5ml centrifuge tubes

    H5000-5MT Benchmark Scientific 1 PC 382.55 EUR

    5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, assorted colors

    C2500-AST MTC Bio 200/pack 76.66 EUR

    5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, blue tinted

    C2500-B MTC Bio 200/pack 76.66 EUR

    5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, green tinted

    C2500-G MTC Bio 200/pack 76.66 EUR

    5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, red tinted

    C2500-R MTC Bio 200/pack 76.66 EUR

    5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, yellow tinted

    C2500-Y MTC Bio 200/pack 76.66 EUR

    Serological Pipettes, 5ml, 400 per case

    SP102116 Bio Basic 1CS, 400UNIT 179.94 EUR

    5ML PIPET TIPS COMPATIBLE WITH GILSON

    T-5000-C CORNING 250/pk 161 EUR

    Serological Pipettes, 5ml , Sterile, Individually Wrapped

    LC3063-200 GenDepot 200/pk 111 EUR

    Non-Sterile 5mL Transport Tube (Axygen)

    TUBE5AX Next Advance 1000box 214 EUR

    CENT TUBE,DISP,SCREW CAP,5ML

    99502-5 CORNING 125/pk 97 EUR

    Human Serum IgG Depl Pooled (5mL)

    34021-5 Pel-Freez 5mL 130.25 EUR

    7077 5 PIPET 5ML STERILE STERILE

    7077-5N CORNING 120/pk 248 EUR

    7078 5 PIPET 5ML STERILE STERILE

    7078-5N CORNING 240/pk 282 EUR

    7078D 5 PIPET 5ML STERILE STERILE

    7078D-5 CORNING 25/pk 217 EUR

    5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, opaque black tint

    C2500-OB MTC Bio 200/pack 76.66 EUR

    UniversALL; Tissue ExtractionBuffer

    FYU002-5ML Yeastern Biotech 1 ml x 5 Ask for price

    Eugenol

    GK9909-5ML Glentham Life Sciences 5 ml 42 EUR

    Linolenic acid

    GL9596-5ML Glentham Life Sciences 5 ml 54 EUR

    Phenyl isothiocyanate, 99%

    GX7854-5ML Glentham Life Sciences 5 ml 118 EUR

    SDS-PAGE Sample Loading Buffer (2x)

    abx090647-5ml Abbexa 5 ml 175 EUR

    SDS-PAGE Sample Loading Buffer (5x)

    abx090648-5ml Abbexa 5 ml 189 EUR

    SDS-PAGE Sample Loading Buffer (6x)

    abx090649-5ml Abbexa 5 ml 203 EUR

    Native Gel Sample Loading Buffer (2x)

    abx090650-5ml Abbexa 5 ml 175 EUR

    Native Gel Sample Loading Buffer (5x)

    abx090651-5ml Abbexa 5 ml 189 EUR

    Protein A Resin

    abx098111-5ml Abbexa 5 ml 398 EUR

    Protein G Resin

    abx098112-5ml Abbexa 5 ml 439 EUR

    6x Protein Loading Buffer

    abx098124-5ml Abbexa 5 ml 189 EUR

    G418

    abx098131-5ml Abbexa 5 ml 217 EUR

    DNA Loading Buffer

    abx098143-5ml Abbexa 5 ml 175 EUR

    Library Dilution Buffer

    abx098898-5ml Abbexa 5 ml 258 EUR

    Human Lipoprotein (a) Calibrator 3 Protein

    abx060886-5ml Abbexa 5 ml 342 EUR

    Synaptopodin (SYNPO) Antibody

    abx020657-5ml Abbexa 5 ml 996 EUR

    Lamin (Mixed) Antibody

    abx020891-5ml Abbexa 5 ml 592 EUR

    Lymphocytic Choriomeningitis Virus (LCMV) Antibody

    abx022049-5ml Abbexa 5 ml 676 EUR

    Desmocollin 3 (DSC3) Antibody

    abx022465-5ml Abbexa 5 ml 968 EUR

    MHC Class II I-Ab Antibody

    abx412635-5ml Abbexa 5 ml 606 EUR

    Cytokeratin 18 / CK-18 (KRT18) Antibody

    abx413457-5ml Abbexa 5 ml 606 EUR

    Epithelial Cell Adhesion Molecule (CD326) Antibody

    abx415574-5ml Abbexa 5 ml 606 EUR

    C to C Lysis Buffer

    abx298007-5ml Abbexa 5 ml 286 EUR

    CDM-XF Supplement

    abx298010-5ml Abbexa 5 ml 286 EUR

    StemBoost? Reprogramming Cocktail Set I (1000X), Sterile-Filtered

    K869-5ML Biovision 805 EUR

    StemBoost? Reprogramming Cocktail Set II (1000X), Sterile-Filtered

    K870-5ML Biovision 805 EUR

    StemBoost? YPAC Cocktail Set (1000X), Sterile-Filtered

    K871-5ML Biovision 903 EUR

    StemBoost? 2i-Reprogramming Cocktail Set (1000X), Sterile-Filtered

    K889-5ML Biovision 588 EUR
    Pacjenci z trzema RF wykazali największe zmiany LSM zarówno w grupach poprawiających się (-3,68 kPa), jak i pogarszających się (+3,19 kPa). Najsilniejszymi predyktorami zmiany LSM były BMI i HbA 1c , ze standaryzowanymi współczynnikami β 0,236 i 0,226 ( p  < 0,001), natomiast TC miał najmniejszy wpływ [0,112 ( p  < 0,01),  F (3,647) = 11,458,  p  < 0,001 ,  R2  =  0,155].
    Najbardziej widoczna była otyłość

Leave a Reply

Your email address will not be published.