-
- Peptyd C jest markerem wydzielania insuliny u pacjentów z cukrzycą. Oceniliśmy wewnątrz- i międzylaboratoryjną nieprecyzyjność oznaczeń peptydu C i ustaliliśmy, czy kalibratory surowicy z wartościami przypisanymi przez spektrometrię mas mogą być użyte do harmonizacji wyników dla peptydu C.
- Wysłaliśmy 40 różnych próbek surowicy do 15 laboratoriów, które stosowały 9 różnych rutynowych metod oznaczania peptydu C. Wysłaliśmy również dopasowane próbki osocza do innego laboratorium w celu analizy peptydu C przy użyciu referencyjnej metody spektrometrii masowej. Każde laboratorium analizowało 8 z tych próbek w dwóch egzemplarzach w każdym z 4 dni, aby ocenić niedokładność w ciągu dnia i pomiędzy dniami. Te same 8 próbek wykorzystano również do normalizacji wyników dla pozostałych próbek do metody referencyjnej spektrometrii masowej.
- CV w trakcie i między seriami wahały się odpowiednio od <2% do >10% i od <2% do >18%. Normalizacja wyników za pomocą próbek surowicy znacznie poprawiła porównywalność między laboratoriami i metodami. Po normalizacji różnice między laboratoriami w średniej odpowiedzi nie były już istotne statystycznie (P = 0,24), z najmniejszymi kwadratami.
- Wyniki dla peptydu C uzyskane różnymi metodami i laboratoriami nie zawsze są zgodne, zwłaszcza przy wyższych stężeniach peptydu C. Nieprecyzyjność wewnątrzlaboratoryjna również była zróżnicowana, a niektóre metody dawały znacznie bardziej spójne wyniki niż inne. Dane te pokazują, że kalibracja pomiaru peptydu C z metodą referencyjną może zwiększyć porównywalność między laboratoriami.
Ocena dostępnych w handlu testów radioimmunologicznych i testów ELISA specyficznych dla gatunku do pomiaru wysokich stężeń insuliny u koni .
- Ocena ludzkiego testu radioimmunologicznego (RIA) oraz testów ELISA swoistych dla gatunku koni i świń (hrp) w celu pomiaru wysokiego stężenia insuliny w surowicy u kuców.
- Próbki surowicy od 12 zdrowych nieotyłych kucyków (7 klinicznie prawidłowych i 5 podatnych na ochwat; 13 do 26 lat; 11 klaczy i 1 wałach) przed i po podaniu glukozy, insuliny i deksametazonu
- Oceniono powtarzalność wewnątrz i między testami, stabilność zamrażania-rozmrażania, równoległość rozcieńczeń i zgodność testu
- Granice wykrywalności testu były następujące: RIA, < 389 μU/mL; koński test ELISA, < 175 μU/ml; i hrp ELISA, od 293 do 8775 μU/ml. Średnie ± SD powtarzalność wewnątrz- i pomiędzy testami wyniosły odpowiednio: RIA 6,5 ± 5,1% i 74 ± 3,4%; koński test ELISA, 10,6 ± 11,0% i 9,0 ± 4,6%; i hrp ELISA, 19,9 ± 172% i 173 ± 16,6%.
- Zamrażanie i rozmrażanie wpłynęło na mierzone stężenia . Równoległość rozcieńczeń w RIA była widoczna tylko wtedy, gdy jako rozcieńczalnik stosowano surowicę końską zubożoną w insulinę (odzysk procentowy 95,7 ± 274%); w testach ELISA zaobserwowano równoległość rozcieńczeń, gdy zastosowano kalibrator zerowy.
- Zgodność wyników RIA z końskim testem ELISA była dobra dla próbek zawierających stężenia < 175 μU insuliny /mL (odchylenie, -18,5 ± 25,5 μU/mL; wyższe w RIA). Przy wyższych stężeniach zgodność testu była słaba między wynikami testu RIA i końskiego ELISA (odchylenie, -185,3 ± 98,7 μU/mL) oraz między wynikami RIA i hrp ELISA (odchylenie, 25,3 ± 183,0 μU/mL).
- Zgodność wyników 3 testów była zmienna, a równoległość rozcieńczeń była widoczna tylko w przypadku RIA, gdy badano surowicę końską zubożoną w insulinę . Zaleca się ostrożność podczas oceny wysokich stężeń insuliny mierzonych testami RIA lub ELISA .
W kierunku standaryzacji testów immunologicznych na insulinę .
- Pomiar krążącej insuliny może poprawić klasyfikację i leczenie cukrzycy oraz pomóc w leczeniu osób z insulinoopornością .
- Grupa robocza zwołana przez American Diabetes Association oceniła wyniki panelu 39 surowic od pojedynczych dawców, mierzone 10 komercyjnymi metodami insuliny od 9 producentów, w porównaniu z procedurą pomiaru izotopowej chromatografii cieczowej/tandemowej spektrometrii mas (IDMS) skalibrowanej przy użyciu oczyszczonej rekombinowanej insuliny . Wykorzystaliśmy kandydacki materiał referencyjny z pierwotnej (czystej substancji), pulę surowicy i surowice od pojedynczego dawcy, aby ocenić podejścia mające na celu osiągnięcie lepszej zgodności wyników między rutynowymi i referencyjnymi procedurami pomiarowymi.
- W czterech z 10 metod uzyskano >>lub=95% indywidualnych wyników w surowicy w granicach 32% stężeń IDMS. Jednak błąd systematyczny w stosunku do IDMS wyniósł ponad 15,5% dla 7 z 10 metod w 36%-100% indywidualnych próbek. Oczyszczony preparat rekombinowanej insuliny stosowany jako wspólny kalibrator nie poprawił harmonizacji wyników wśród rutynowych metod, ale nie był stosowany zgodnie z zaleceniami wszystkich uczestników. Kalibracja z użyciem pul surowicy osiągnęła błąd systematyczny <15,5% dla prawie wszystkich wyników w zakresie stężeń objętych pulami (>60 pmol/l). Kalibracja przy użyciu panelu poszczególnych surowic była najskuteczniejsza w poprawie harmonizacji wyników w całym zakresie pomiarowym.
- Zgodność między metodami można poprawić, ustalając identyfikowalność procedury IDMS przy użyciu panelu surowic natywnych. Zebrane surowice mogą być przydatne jako materiały do kontroli prawdziwości. Przydatność pierwotnego materiału odniesienia dla czystej insuliny [kandydat materiału odniesienia dla insuliny (cRMI)] wymaga wyjaśnienia protokołów stosowanych przez producentów.
Wysoce czuły test immunoenzymatyczny immunoreaktywności proinsuliny z użyciem dwóch przeciwciał monoklonalnych.
- Opracowano wysoce czuły, dwumiejscowy test ELISA typu sandwich, mierzący całkowity materiał immunoreaktywny dla proinsuliny w surowicy lub osoczu. Test oparto na dwóch przeciwciałach monoklonalnych, przeciwciału anty-peptydowym C związanym z płytką mikrotestową oraz przeciwciału przeciw insulinie znakowanym biotyną .
- Granica wykrywalności (3 SD powyżej wartości zerowej) w buforze wynosiła 0,05 pmol/L, co odpowiada 0,25 pmol/L w surowicy ludzkiej (rozcieńczonej 1:5). Zakres kalibratora liniowego wynosił 0,05-20 pmol/L. CV między testami wynosiły 4,7% przy medianie (zakres) 2,3 pmol/l (1,4-2,8 pmol/l, n = 8), 6,7% przy 5,1 pmol/l (3,3-8,0 pmol/l, n = 8) i 8,7% przy 10,0 pmol/l (8-12 pmol/l, n = 10). Średni analityczny odzysk dodanej ludzkiej proinsuliny (hPI) (2, 5 i 10 pmol/l) do surowicy wyniósł 84% (zakres 68-128%, n = 9).
- Ludzka insulina i ludzki peptyd C nie reagowały krzyżowo odpowiednio przy 5000 i 10000 pmol/l. Cztery główne produkty pośrednie konwersji proinsuliny reagowały 65-99%: split(32-33)hPI 74%, des-(31,32)hPI 65%, split(65-66)hPI 78% i des(64,65 )hPI 99%. Wszystkie wartości w surowicy od 38 zdrowych osób na czczo były powyżej granicy wykrywalności: mediana (zakres) 4,0 (2,1-12,6) pmol/l.
Ustanowienie RT-PCR w czasie rzeczywistym w celu określenia bezwzględnych ilości ekspresji genów IGF-I i IGF-II w wątrobie i pozawątrobowych miejscach tilapii.
- Opracowaliśmy jednoprobówkę RT-PCR w dwóch temperaturach w czasie rzeczywistym, która pozwala na bezwzględną ocenę ilościową ekspresji genów hormonów przy użyciu metody krzywej standardowej.
- Ponieważ nasze badania koncentrują się na ekspresji insulinopodobnych czynników wzrostu (IGF) u ryb kostnych, opracowaliśmy technikę IGF-I i IGF-II, wykorzystując tilapię (Oreochromis niloticus) jako gatunek modelowy .
- Jako podejście zastosowaliśmy wydłużanie startera dodając promotor polimerazy faga T7 (21 nt) do końca 5′ starterów antysensownych. Ta procedura pozwala uniknąć wad wynikających z plazmidów.
- Całkowity RNA wyekstrahowany z wątroby poddano konwencjonalnej reakcji RT-PCR w celu stworzenia matryc do transkrypcji cRNA IGF-I i IGF-II in vitro.
- Zweryfikowano prawidłowe rozmiary matryc, w tym promotor T7 (IGF-I: 91 nt; IGF-II: 94 nt). Produkty PCR wykorzystano do wytworzenia cRNA IGF-I i IGF-II, które oznaczono ilościowo metodą dot blot przez porównanie z określonymi ilościami standaryzowanego mRNA kanamycyny.
- Standaryzowane wartości cyklu progowego (Ct) dla mRNA IGF-I i IGF-II osiągnięto za pomocą RT-PCR w czasie rzeczywistym i wykorzystano do utworzenia krzywych standardowych.
- Aby umożliwić normalizację próbki, wyznaczono również krzywą standardową dla beta-aktyny jako wewnętrznego kalibratora (wzorzec: 86 nt) i przeprowadzono eksperymenty walidacyjne wykazujące podobną skuteczność amplifikacji dla genów docelowych i referencyjnych.
- Na podstawie krzywych standardowych wyznaczono bezwzględne ilości mRNA IGF-I i IGF-II dla wątroby (IGF-I: 8,90 +/- 1,90 pg/mikrogram całkowitego RNA, IGF-II: 3,59 +/- 0,98 pg/mikrogen całkowite RNA) i miejsca pozawątrobowe, takie jak serce, nerki, jelita, śledziona, skrzela, gonady i mózg, biorąc pod uwagę różne długości cRNA i mRNA przez czynniki korekcyjne.
- Wiarygodność metody została potwierdzona w dodatkowych eksperymentach.
- Amplifikacja malejących rozcieńczeń cRNA i całkowitego RNA wątroby skutkowała równoległymi nachyleniami krzywych amplifikacji.
- Ponadto, wykresy amplifikacji standardowego cRNA oraz mRNA IGF-I i IGF-II wykazywały sygnały rozpoczynające się od oczekiwanych wartości Ct. Tak więc opisany tutaj jednoprobówkowy RT-PCR jest bardzo czuły (poziom wykrywania około 2 pg/mikrona całkowitego RNA) i umożliwia dokładną bezwzględną ocenę ilościową.
Phenol 7 Comp Mix Std Various Concentrations in Acetone
REPHE121 Scientific Laboratory Supplies PK5 2484.56 EUR XP Up Screen, Crystallization Screen for high TEW concentrations
M-CS-351 MiTeGen 1 Kit 866 EUR Organic CLP Standard in Methylene Chloride:Acetone varied concentrations 1mL Ampule
CLP90-SURR Scientific Laboratory Supplies 1ML 156 EUR Insulin Antigen Concentrate
F043H Cygnus Technologies 100 ul 447.6 EUR CRP calibrator
35-CC30 Fitzgerald 1 L Ask for price Insulin; Clone 2D11-H5 (Concentrate)
A00114-C ScyTek Laboratories 1 ml 524.4 EUR T3 Calibrator Set
35-0051 Fitzgerald set Ask for price CRP calibrator set
35-S6021H000-L4 Fitzgerald 5 ml 159.6 EUR ApoA-I + B calibrator
35-AC05 Fitzgerald 1 L Ask for price Human Serum calibrator 4
35-S64010000-L4 Fitzgerald 10 ml 152.4 EUR Human Glucose concentration(Glucose concentration) ELISA Kit
QY-E05365 Qayee Biotechnology 96T 433.2 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone IRDN/794 (Concentrate)
RA0164-C.1 ScyTek Laboratories 0.1 ml 150 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone IRDN/794 (Concentrate)
RA0164-C.5 ScyTek Laboratories 0.5 ml 360 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone IRDN/805 (Concentrate)
RA0165-C.1 ScyTek Laboratories 0.1 ml 150 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone IRDN/805 (Concentrate)
RA0165-C.5 ScyTek Laboratories 0.5 ml 360 EUR CEA Calibrator Grade Protein
abx060978-1mg Abbexa 1 mg 1387.2 EUR Human Serum calibrator 3 (2X)
35-S63010000-L4 Fitzgerald 10 ml 152.4 EUR Human Serum calibrator 3 (2X)
35-S7703H000-L3 Fitzgerald 10 ml 146.4 EUR AMP-Fluorescein conjugate calibrator
13610 AAT Bioquest 100 nmol 334 EUR GMP-Fluorescein conjugate calibrator
13611 AAT Bioquest 100 nmol 558 EUR AMP-Fluorescein conjugate calibrator
13610-100nmol AAT Bioquest 100 nmol 334 EUR GMP-Fluorescein conjugate calibrator
13611-100nmol AAT Bioquest 100 nmol 558 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone E2-E3 (INS04) (Concentrate)
RA0162-C.1 ScyTek Laboratories 0.1 ml 150 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone E2-E3 (INS04) (Concentrate)
RA0162-C.5 ScyTek Laboratories 0.5 ml 360 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone 2D11-H5 (INS05) (Concentrate)
RA0161-C.1 ScyTek Laboratories 0.1 ml 150 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone 2D11-H5 (INS05) (Concentrate)
RA0161-C.5 ScyTek Laboratories 0.5 ml 360 EUR Lipoprotein a protein calibrator
35-LC05 Fitzgerald 1 L Ask for price BSA Calibrator [Bradford Assay Kit]
0209C AthenaES 0.5 ml 123.6 EUR CA19-9 Calibrator Grade Protein
abx061026-50kU Abbexa 50 kU 627.6 EUR CA19-9 Calibrator Grade Protein
abx061027-50kU Abbexa 50 kU 627.6 EUR Kpn I -HC unit: 5000, High Concentration
YRKPN1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Msp I -HC unit: 1400, High Concentration
YRMSP1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Nco I -HC unit: 400, High Concentration
YRNCO1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Pst I -HC unit: 12000, High Concentration
YRPST1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Pvu II -HC unit: 2000, High Concentration
YRPVU2-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Rsa I -HC unit: 800, High Concentration
YRRSA1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Sal I -HC unit: 2200, High Concentration
YRSAL1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Sma I -HC unit: 1500, High Concentration
YRSMA1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Taq I -HC unit: 410, High Concentration
YRTAQ1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Xba I -HC unit: 3000, High Concentration
YRXBA1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Xho I -HC unit: 5000, High Concentration
YRXHO1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price ETHANOL, 70% CONCENTRATION
IB15727 IBI Scientific 10L 210.13 EUR Cardiac Troponin I Calibrator Set
35R-AT01 Fitzgerald set 1526.4 EUR pSET152- Low concentration
PVT11339 Lifescience Market 2 ug 444 EUR AvaI -HC unit: 330, High Concentration
YRAVA1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Dra I-HC unit: 3500, High Concentration
YRDRA1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price EcoR I -HC unit: 12000, High Concentration
YRECOR1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price SacI -HC unit: 1500, High Concentration
YRSAC1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Human CA50 Calibrator Grade Protein
abx060975-50kU Abbexa 50 kU 1880.4 EUR BD High Concentration Laminin
354259 Scientific Laboratory Supplies EACH 754.8 EUR pSET152- high concentration
PVT11338 Lifescience Market 2 ug 444 EUR BamH I-HC unit: 12000, High Concentration
YRBAMH1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Bgl II-HC unit: 2500, High Concentration
YRBGL2-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price EcoR V-HC unit: 2000, High Concentration
YRECOR5-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Hind III -HC unit: 12000, High Concentration
YRHIND3-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Hinf I-HC unit: 2000, High Concentration
YRHINF1-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Human CA125 Calibrator Grade Protein
abx060961-50kU Abbexa 50 kU 577.2 EUR Human CA242 Calibrator Grade Protein
abx060974-50kU Abbexa 50 kU 1387.2 EUR dNTP SET, Concentration: 100mM, 4x1ml set of dNTP consisting 4 separate tubes (4x1ml) each with 100mM concentration of dATP, dGTP, dCTP, and dTTP.
2013SET ACTGene each 561.6 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone E2-E3 & 2D11-H5 (INS04 & INS05) (Concentrate)
RA0163-C.1 ScyTek Laboratories 0.1 ml 150 EUR Insulin / IRDN (Beta Cell & Insulinoma Marker); Clone E2-E3 & 2D11-H5 (INS04 & INS05) (Concentrate)
RA0163-C.5 ScyTek Laboratories 0.5 ml 360 EUR BssH II-HC unit: 200, High Concentration
YRBSSH2-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price BstE II-HC unit: 1300, High Concentration
YRBSTE2-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price EcoT38 I -HC unit: 900, High Concentration
YRECOT38-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Hae III-HC unit: 3400, High Concentration
YRHAE3-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price Hinc II-HC unit: 500, High Concentration
YRHINC2-HC Yeastern Biotech 1 vial Ask for price VOC Std 14 Comp Mix Mixed Concentration in MeOH
REVOC0183 Scientific Laboratory Supplies 1ML 520.93 EUR Recombinant CEA Protein (Calibrator Grade)
VAng-Wyb8648-inquire Creative Biolabs inquire Ask for price ViaCheck™ Concentration Control 1 x 106
24627-20 Polysciences Europe GmbH 20ml 216 EUR ViaCheck™ Concentration Control 4 x 106
24628-20 Polysciences Europe GmbH 20ml 329 EUR ViaCheck™ Concentration Control 8 x 106
24629-20 Polysciences Europe GmbH 20ml 372 EUR ViaCheck™ Concentration Control (0.5 × 106)
VC50N-20 Polysciences Europe GmbH 20 mL 216 EUR ViaCheck™ Concentration Control (1 × 106)
VC60N-20 Polysciences Europe GmbH 20 mL 216 EUR ViaCheck™ % Concentration Control (4 × 106)
VC70N-20 Polysciences Europe GmbH 20 mL 329 EUR ViaCheck™ % Concentration Control (8 × 106)
VC80N-20 Polysciences Europe GmbH 20 mL 372 EUR High Concentration Acid Surrogate
CLP90-75SA Scientific Laboratory Supplies 1ML 230.4 EUR pRK2013- 1 (Low concentration) Plasmid
PVT5705 Lifescience Market 2 ug 390 EUR UPCK™ Urine Protein Concentration Kit
UPCK-10 Biotech Support Group 10 preps 540 EUR UPCK™ Urine Protein Concentration Kit
UPCK-25 Biotech Support Group 25 preps 1143.6 EUR Human CA125 LCR Calibrator Grade Protein
abx060963-50kU Abbexa 50 kU 861.6 EUR Human CA125 LCR Calibrator Grade Protein
abx060964-50kU Abbexa 50 kU 861.6 EUR Human CA125 LCR Calibrator Grade Protein
abx060971-50kU Abbexa 50 kU 861.6 EUR pRK2013- 2 (High concentration) Plasmid
PVT5706 Lifescience Market 2 ug 390 EUR Troponin I Cardiac Calibrator Set Protein
abx060754-1Set Abbexa 1 Set 2464.8 EUR Human Lipoprotein (a) Calibrator 3 Protein
abx060886-5ml Abbexa 5 ml 410.4 EUR 96 Well Plate RNA Cleanup and Concentration Kit
BRC1251 Bio Basic 2xPlates, 192prep 300.37 EUR Lentivirus concentration reagent
E28F06205 EnoGene 100ml 336.51 EUR ViaCheck™ Concentration Control, 0.5e+6 beads/mL
26409-20 Polysciences Europe GmbH 20ml 216 EUR Lentivirus Concentration Solution (100 mL)
P904C 101Bio - Ask for price Retrovirus Concentration Solution (100 mL)
P905C 101Bio - Ask for price Minimal Inhibitory Concentration Kit
K195-2500 Biovision each 836.4 EUR Minimal Inhibitory Concentration Kit
K195-500 Biovision each 574.8 EUR Human CA15-3 LCR Calibrator Grade Protein
abx060966-50kU Abbexa 50 kU 1813.2 EUR Cumate Solution, high concentration, 10,000x for use with PiggyBac
PBQM100A-1 SBI 500 ul 106 EUR CORNING® LOW CONCENTRATION SYNTHEMAX® II, 1 VIAL , 10 G
3781 CORNING 10g/pk 279.6 EUR Apex MgCl2 Solution, 50mM 50mM Concentration
42-303 Genesee Scientific 3 x 1.5ml/Unit 279 EUR CORNING® LOW CONCENTRATION SYNTHEMAX® II, 1 VIAL , 100 G
4622 CORNING 100g/pk 2042.4 EUR CORNING® LOW CONCENTRATION SYNTHEMAX® II, 1 VIAL , 500 G
4623 CORNING 500g/pk 7777.2 EUR Apex Safe DNA Loading Dye With Stain, 6x Concentration
20-278D Genesee Scientific 1.0ml/Unit 400 EUR EZ-10 Spin Column RNA Cleanup and Concentration Kit
BS91315 Bio Basic 50Preps 119.38 EUR Metoda jest szybka, ponieważ nie ma oddzielnych odwrotnych transkrypcji ani etapów po amplifikacji i można ją przeprowadzić z niskim ryzykiem zanieczyszczenia. Dlatego będzie to pomocne przy badaniu ekspresji genów w dowolnym gatunku i tkance, gdy w grę wchodzą poziomy bezwzględne.