Hamowanie metylacji DNA przez chemiczne czynniki rakotwórcze in vitro

Posted By on June 11, 2022

    1. Różnorodny zakres ostatecznych chemicznych czynników rakotwórczych hamował przenoszenie grup metylowych z S-adenozylometioniny do hemimetylowanego DNA w reakcji katalizowanej przez metylotransferazę śledziony myszy.
    2. Tworzenie się miejsc nietrwałych w środowisku zasadowym w DNA zmniejszyło jego zdolność do akceptowania grup metylowych in vitro, ale reakcja metylacji była znacznie mniej wrażliwa na dimery tyminy   lub pęknięcia dwuniciowe . Substancje rakotwórcze indukowały powstawanie uszkodzeń DNA nietrwałych w środowisku zasadowym, ale obserwowany stopień hamowania metylotransferazy był wyższy niż oczekiwany dla samego tego uszkodzenia.
    3. Niektóre czynniki rakotwórcze były również zdolne do bezpośredniej modyfikacji i inaktywacji enzymu metylotransferazy. Traktowanie benzo(a)pirenem żywych komórek BALB/3T3 A31 z  klonu  1-13, ale nie komórek C3H/10T1/2  klonu  8, spowodowało 12% spadek całkowitej zawartości 5-metylocytozyny w komórkowym DNA.
    4. Czynniki rakotwórcze mogą zatem powodować dziedziczne zmiany we wzorcach 5-metylocytozyny w niektórych typach komórek za pomocą różnych mechanizmów, w tym tworzenia adduktów, indukcji miejsc apurynowych i pęknięć pojedynczej nici oraz bezpośredniej inaktywacji metylotransferazy DNA.

    Rola polimerazy DNA eta w spektrum mutacji UV w komórkach ludzkich.

    • U ludzi inaktywacja genu polimerazy DNA eta (pol eta) powoduje wrażliwość na światło słoneczne i powoduje podatny na raka zespół wariantu xeroderma pigmentosum (XP-V). Komórki od osobników XP-V mają zmniejszoną zdolność do replikacji DNA uszkodzonego przez promieniowanie UV i wykazują hipermutowalność po ekspozycji na promieniowanie UV.
    • Testy biochemiczne wykazały zdolność poleta do omijania  dimerów cis-syn-cyklobutanu tyminy  , najczęstszych uszkodzeń DNA generowanych przez UV. W większości przypadków to obejście jest bezbłędne. Aby określić faktyczne zapotrzebowanie na poleta in vivo, komórki XP-V (XP30RO) uzupełniono genem poleta typu dzikiego.
    • Użyliśmy dwóch  klonów skorygowanych o pole poleta,  aby zbadać in vivo charakterystykę mutacji wytwarzanych przez polimerazy DNA podczas syntezy DNA napromieniowanych UV wektorów wahadłowych transfekowanych do ludzkich komórek gospodarzy, które były lub nie były wcześniej eksponowane na promieniowanie UV.
    • Funkcjonalne uzupełnienie komórek XP-V przez poleta zmniejszyło częstość mutacji zarówno w parach zasad CG, jak i TA i przywróciło mutagenezę UV do normalnego poziomu. Napromienianie UV komórek gospodarza przed transfekcją silnie zwiększało częstość mutacji w nieuszkodzonych wektorach, a ponadto, zwłaszcza w komórkach XP30RO z niedoborem polata w miejscach 5′-TT w plazmidach napromieniowanych UV.
    • Wyniki te wyraźnie wskazują na ochronną rolę poleta przed zmianami wywoływanymi przez promieniowanie UV oraz aktywację przez UV procesów mutagennych niezależnych od polata.

    Klonowanie molekularne ludzkiego genu naprawy przez wycinanie nukleotydów ERCC4.

    1. ERCC4 został wcześniej zidentyfikowany w hybrydach komórek somatycznych jako ludzki gen, który koryguje niedobór naprawy po wycięciu nukleotydów w zmutowanych komórkach chomika. Strategia klonowania ERCC4 obejmowała transfekcję linii komórkowej chomika UV41 z niedoborem naprawy za pomocą biblioteki kosmidowej ludzkiego sCos-1 pochodzącej z chromosomu 16.
    2. Zwiększoną odporność na promieniowanie UV zaobserwowano w przypadku jednego transformanta z biblioteki kosmidowej i dwóch drugorzędowych transformantów UV41. Klony kosmidowe   niosące funkcjonalny gen ERCC4 wyizolowano z biblioteki wtórnego transformanta przez selekcję w Escherichia coli do ekspresji połączonego genu oporności na neomycynę, który był obecny w wektorze sCos-1.
    3. Kosmidy zmapowały do ​​16p13.13-p13.2, lokalizację przypisaną do ERCC4 za pomocą hybryd komórek somatycznych. Po transfekcji do UV41 sześć  klonów kosmidowych  dało częściową korekcję w zakresie od 30% do 64%, chociaż wszystkie wydawały się zawierać cały gen . Zdolność do wycinania in vitro  dimerów tyminy   z plazmidu przez ekstrakty komórek transformantów korelowała jakościowo ze zwiększoną odpornością na promieniowanie UV.

    Wpływ promieniowania ultrafioletowego (UV) A, UVB lub promieniowania jonizującego na cykl komórkowy komórek czerniaka ludzkiego.

    • Jednym z ważnych elementów odpowiedzi komórkowej na napromieniowanie jest aktywacja punktów kontrolnych cyklu komórkowego. Wiadomo, że zarówno promieniowanie ultrafioletowe (UV), jak i jonizujące (IR) mogą aktywować punkty kontrolne przy przejściu z fazy G(1) do S, z fazy G(2) do mitozy oraz podczas replikacji DNA.
    • Ocena wpływu napromieniania różnymi długościami fal na zmiany cyklu komórkowego.
    • Komórki czerniaka IPC-298 z niedoborem p53 napromieniowano 10 J cm(-2) UVA, 40 mJ cm(-2) UVB lub 7,5 Gy IR. Efekty cyklu komórkowego określono następnie za pomocą dwuparametrowej cytometrii przepływowej DNA/5-bromodeoksyurydyna.
    • Komórki IPC-298 napromieniowane w G(1) za pomocą UVA nie zostały zatrzymane przy przejściu G(1)/S, ale przy przejściu G(2)/M. Pomimo niedoboru p53, komórki wykazywały zatrzymanie G(1) po ekspozycji na UVB. Co więcej, IR nie wpływał na fazę G(1) ani S, ale wywoływał zatrzymanie fazy G(2). Stąd wpływ UVA, ale nie UVB, na cykl komórkowy w komórkach czerniaka z niedoborem p53 jest porównywalny z wpływem IR.
    • UVA i IR indukują przerwy nici i uszkodzenia DNA, w których pośredniczą rodniki, a UVB zasadniczo indukuje  dimery tyminy   , które prowadzą do pęknięć nici związanych z naprawą wycięcia. Różne efekty cyklu komórkowego mogą być konsekwencją różnych rodzajów uszkodzeń DNA. Wyniki pokazały, że napromieniowane UVB komórki z niedoborem p53 są zatrzymane w G(1). Napromienianie składnikiem promieniowania słonecznego UVB może zatem skutkować korzystnym opóźnieniem rozwoju nowotworu w ludzkiej skórze niosącej  klony komórek z mutacją p53 .

    Deoksyrybozymy katalizujące fotochemię: fotonaprawa  dimerów tyminy  zależna i niezależna od kofaktora .

    • Strategie eksperymentalne obejmujące selekcję in vitro, zaprojektowane w celu przetestowania słuszności „hipotezy świata RNA”, wykazały znacznie szerszy zakres katalityczny dla RNA (i ogólnie kwasów nukleinowych) niż w przypadku naturalnie występujących rybozymów.
    • Chcieliśmy zbadać, czy reakcje fotochemiczne mogą być katalizowane przez enzymy kwasu nukleinowego. Przeprowadzono eksperymenty selekcyjne in vitro w celu uzyskania deoksyrybozymów „fotoliazy”, zdolnych do fotoodwracania  dimerów tyminy –  cyklobutanu   w obecności kofaktora – serotoniny.
    • Podczas selekcji in vitro z  tyminy – dimeru  zawierającego losową bibliotekę DNA, napromieniowanej światłem >300 nm, pojawiły się dwie pule katalitycznych cząsteczek nukleinowych – jedna, która wymagała serotoniny do aktywności, a druga, co zaskakujące, nie wymagała. Charakterystyka klonów niezależnych od serotoniny   wykazała, że ​​optymalna długość fali dla ich aktywności naprawczej (około 1400-krotność) wynosi około 300 nm, zwłaszcza przesunięta ku czerwieni od maksimum absorpcji samego DNA.

    LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Thymine Dimer d (TgpT) (50 µg)
    0801215 Zeptometrix 50 µg 118.64 EUR

    LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Thymine Dimer d (PfpT) (50 µg)
    0801212 Zeptometrix 50 µg 118.64 EUR

    Anti-PON1 Clone KRJ1 (100 µg)
    0801012 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-PON1 Clone KRJ2 (100 µg)
    0801014 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Guanine Dimer d (TgpG) (50 µg)
    0801214 Zeptometrix 50 µg 118.64 EUR

    LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Adenine Dimer d (TgpA) (50 µg)
    0801217 Zeptometrix 50 µg 118.64 EUR

    Anti-Zika NS1 Clone 1D12 (100 µg)
    0801025 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-Zika Envelope Clone 4C7 (100 µg)
    0801026 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Random Hexamers 100 µg
    26-4000-03 Gene Link 100 ug 125 EUR

    Anti-HIV Type 1 gp41 Clone 10E9 (100 µg)
    0801006 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HIV Type 1 p17 Clone 2D11 (100 µg)
    0801076 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HTLV Type I p19 Clone TP-7 (100 µg)
    0801003 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HIV Type 1 p24 Clone 38/8.7.47 (100 µg)
    0801004 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HIV Type 1 p17 Clone 32/5.8.42 (100 µg)
    0801005 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HIV Type 1 RT Clone 39/4.12.2 (100 µg)
    0801007 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HTLV Type I p24 Clone 46/3.24.4 (100 µg)
    0801018 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HIV Type 1 p17 Clone 32/1.24.89 (100 µg)
    0801077 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HIV Type 1 p24 Clone 32/5.17.76 (100 µg)
    0801078 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HIV Type 1 p24 Clone 39/5.1.23 (100 µg)
    0801079 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HIV Type 1 p24 Clone 39/5.4A (100 µg)
    0801080 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HIV Type 1 p24 Clone 39/6.14 (100 µg)
    0801081 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HTLV Type I p19 Clone 45/6.11.1.3 (100 µg)
    0801082 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HTLV Type I gp46 Clone 67/5.5.13.1 (100 µg)
    0801084 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HTLV Type I gp46 Clone 68/4.11.21 (100 µg)
    0801085 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HTLV Type II gp46 Clone 73/4.9.8 (100 µg)
    0801086 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HTLV Type II p24 Clone 75/4.21.11 (100 µg)
    0801087 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HTLV Type II p19 Clone 78/6.18.07 (100 µg)
    0801093 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Anti-HTLV Type I gp46 Clone 65/6C2.2.34 (100 µg)
    0802004 Zeptometrix 100 µg 284 EUR

    Thymine
    HY-W010450 MedChemExpress 500mg 108 EUR

    Thymine
    abx082195-5g Abbexa 5 g 203 EUR

    Thymine
    abx082345-5g Abbexa 5 g 217 EUR

    Thymine
    TB0943 Bio Basic 100g 84.8 EUR

    Thymine
    GE5340-25G Glentham Life Sciences 25 g 62 EUR

    Thymine
    GE5340-5G Glentham Life Sciences 5 g 44 EUR

    Thymine
    TBW00812 ChemNorm 100mg Ask for price

    CORNING® RLAMININ-521 (HUMAN), 100 µG
    354221 CORNING 1/pk 86 EUR

    Bcl-2 Antibody (Clone Bcl-2/100)
    3195-100 Biovision 359 EUR

    LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Cytidine Dimer d (TgpC) (50µg)
    0801216 Zeptometrix 50µg 118.64 EUR

    LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Guanine Dimer d (PfpG) (50 µg)
    0801210 Zeptometrix 50 µg 118.64 EUR

    LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Cytidine Dimer d (PfpC) (50 µg)
    0801211 Zeptometrix 50 µg 118.64 EUR

    LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Adenine Dimer d (PfpA) (50 µg)
    0801213 Zeptometrix 50 µg 118.64 EUR

    D-Dimer, Human Plasma
    P1434-100 Biovision 207 EUR

    LIMITED QTY-rhIL-2 Recombinant Human Interleukin-2 (100 µg)
    0802001 Zeptometrix 100 µg 362 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Plasma, 2 vials)
    M1041-2 Biovision 711 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Plasma, 4 vials)
    M1041-4 Biovision 1137 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Plasma, 6 vials)
    M1041-6 Biovision 1572 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Serum, 2 vials)
    M1043-2 Biovision 713 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Serum, 4 vials)
    M1043-4 Biovision 1132 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Serum, 6 vials)
    M1043-6 Biovision 1572 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Urine, 2 vials)
    M1045-2 Biovision 707 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Urine, 4 vials)
    M1045-4 Biovision 1137 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Urine, 6 vials)
    M1045-6 Biovision 1572 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Saliva, 2 vials)
    M1047-2 Biovision 729 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Saliva, 4 vials)
    M1047-4 Biovision 1137 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, Human Saliva, 6 vials)
    M1047-6 Biovision 1621 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, U87 MG, 2 vials)
    M1055-2 Biovision 718 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, U87 MG, 4 vials)
    M1055-4 Biovision 1142 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, U87 MG, 6 vials)
    M1055-6 Biovision 1616 EUR

    AIM-100
    A3148-100 ApexBio 100 mg 1859 EUR

    LB-100
    B4846-100 ApexBio 100 mg 860 EUR

    Monoclonal Bcl-2 Antibody (Clone Bcl-2/100), Clone: Bcl-2/100
    APG02224G Leading Biology 0.1mg 484 EUR

    Anti-D-Dimer Detection Antibody
    A2090-100 Biovision 100 µg 338 EUR

    Anti-D-Dimer Detection Antibody
    A2091-100 Biovision 100 µg 338 EUR

    S-100; Clone 4C4.9 (Concentrate)
    A00087-C ScyTek Laboratories 1 ml 453 EUR

    S-100; Clone 4C4.9 (Concentrate)
    A00087-C.1 ScyTek Laboratories 0.1 ml 138 EUR

    Amphotericin B (Fungizone) Sol, 250 µg/mL
    CCM1120-100 Bio Basic 100 mL 110.23 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, COLO1 cell line, 2 vials)
    M1049-2 Biovision 718 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, COLO1 cell line, 4 vials)
    M1049-4 Biovision 1142 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, COLO1 cell line, 6 vials)
    M1049-6 Biovision 1616 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, MM1 cell line, 2 vials)
    M1051-2 Biovision 718 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, MM1 cell line, 4 vials)
    M1051-4 Biovision 1142 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, MM1 cell line, 6 vials)
    M1051-6 Biovision 1616 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, BLCL21 cell line, 2 vials)
    M1053-2 Biovision 718 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, BLCL21 cell line, 4 vials)
    M1053-4 Biovision 1142 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, BLCL21 cell line, 6 vials)
    M1053-6 Biovision 1572 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, HCT116 cell line, 2 vials)
    M1059-2 Biovision 718 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, HCT116 cell line, 4 vials)
    M1059-4 Biovision 1142 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, HCT116 cell line, 6 vials)
    M1059-6 Biovision 1616 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, PC3 cell line, 2 vials)
    M1061-2 Biovision 718 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, PC3 cell line, 4 vials)
    M1061-4 Biovision 1142 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, PC3 cell line, 6 vials)
    M1061-6 Biovision 1616 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, DAUD1 cell line, 2 vials)
    M1065-2 Biovision 718 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, DAUD1 cell line, 4 vials)
    M1065-4 Biovision 1142 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, DAUD1 cell line, 6 vials)
    M1065-6 Biovision 1616 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, A549 cell line, 2 vials)
    M1067-2 Biovision 718 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, A549 cell line, 4 vials)
    M1067-4 Biovision 1142 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, A549 cell line, 6 vials)
    M1067-6 Biovision 1616 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, B16F10 cell line, 2 vials)
    M1071-2 Biovision 718 EUR

    ExoStd? Lyophilized Exosome Standard (100 µg, B16F10 cell line, 4 vials)
    M1071-4 Biovision 1142 EUR

    MTBK_20640-100
    AR02-P0011-100 Abfrontier 100ug 1133 EUR

    hCRP FRET 100
    CH1008-100 Mediomics 1 Kit 212 EUR

    hCRP TRF 100
    CHTR1008-100 Mediomics 1 Kit 239 EUR

    hAlbumin FRET 100
    AH1005-100 Mediomics 1 Kit 212 EUR

    hAlbumin TRF 100
    AHTR1005-100 Mediomics 1 Kit 239 EUR

    hIgG TRF 100
    HITR1011-100 Mediomics 1 Kit 239 EUR

    hInsulin FRET 100
    IH1010-100 Mediomics 1 Kit 212 EUR

    hInsulin TRF 100
    IHTR1010-100 Mediomics 1 Kit 239 EUR

    S-100 Antibody
    3958-100 Biovision 316 EUR

    Etoposide (100 mM)
    1043-100 Biovision 153 EUR

    rIgG FRET 100
    RI1015-100 Mediomics 1 Kit 212 EUR
    Złożony enzym może zawierać kwadrupleks G (którego widma mają ogony przesunięte ku czerwieni w stosunku do absorbancji dupleksu), a nasza hipoteza przewiduje, że sfałdowany enzym jest anteną do efektywnego kierowania światła lub elektronów do  dimeru tyminy  , w podobny sposób fotoliaz białkowych.

Leave a Reply

Your email address will not be published.