Różnorodny zakres ostatecznych chemicznych czynników rakotwórczych hamował przenoszenie grup metylowych z S-adenozylometioniny do hemimetylowanego DNA w reakcji katalizowanej przez metylotransferazę śledziony myszy. Tworzenie się miejsc nietrwałych w środowisku zasadowym w DNA zmniejszyło jego zdolność do akceptowania grup metylowych in vitro, ale reakcja metylacji była znacznie mniej wrażliwa na dimery tyminy lub pęknięcia dwuniciowe . Substancje rakotwórcze indukowały powstawanie uszkodzeń DNA nietrwałych w środowisku zasadowym, ale obserwowany stopień hamowania metylotransferazy był wyższy niż oczekiwany dla samego…
Termostabilna polimeraza DNA z wirusowego metagenomu jest silnym enzymem RT-PCR
Wirusowe biblioteki metagenomiczne są obiecującym, ale wcześniej niewykorzystanym źródłem nowych enzymów odczynnikowych. Głębokie sekwencjonowanie i funkcjonalne badanie przesiewowe wirusowego metagenomicznego DNA z blisko wrzącej puli termicznej pozwoliło zidentyfikować klony wyrażające aktywność termostabilnej polimerazy DNA (Pol). Wśród nich 3173 Pol wykazywał zarówno wysoką termostabilność, jak i wrodzoną aktywność odwrotnej transkryptazy (RT). Opisujemy biochemię 3173 Pol i opisujemy jego zastosowanie w jednoenzymowej reakcji PCR z odwrotną transkrypcją (RT-PCR). 3173 Pol typu dzikiego zawiera korektorską domenę…
Fluociała: zielone fluorescencyjne jednołańcuchowe białka fuzyjne Fv
Zaprojektowano system ekspresyjny (pSKGFP), który umożliwia ekspresję jednołańcuchowych fragmentów zmiennych jako białek fuzyjnych ze zmodyfikowanymi białkami zielonej fluorescencji. Ten system ekspresyjny jest porównywalny z często stosowanymi wektorami do prezentacji fagowej i umożliwia jednoetapową charakteryzację wybranych rekombinowanych przeciwciał za pomocą cytometrii przepływowej lub barwienia fluorescencyjnego komórek. Dwa różne jednołańcuchowe przeciwciała z fragmentami zmiennymi, oba skierowane przeciwko lipopolisacharydom bakterii Ralstonia solanacearum, poddano fuzji genetycznej z przesuniętym w kierunku czerwieni zielonym białkiem fluorescencyjnym, a…
Standaryzacja pomiarów peptydu C
Peptyd C jest markerem wydzielania insuliny u pacjentów z cukrzycą. Oceniliśmy wewnątrz- i międzylaboratoryjną nieprecyzyjność oznaczeń peptydu C i ustaliliśmy, czy kalibratory surowicy z wartościami przypisanymi przez spektrometrię mas mogą być użyte do harmonizacji wyników dla peptydu C. Wysłaliśmy 40 różnych próbek surowicy do 15 laboratoriów, które stosowały 9 różnych rutynowych metod oznaczania peptydu C. Wysłaliśmy również dopasowane próbki osocza do innego laboratorium w celu analizy peptydu C przy użyciu referencyjnej metody spektrometrii masowej. Każde laboratorium analizowało…
Doustne leki przeciwcukrzycowe: obecna rola w cukrzycy typu 2.
Cukrzyca typu 2 jest postępującym i złożonym schorzeniem, które trudno skutecznie leczyć w dłuższej perspektywie. Większość pacjentów ma nadwagę lub otyłość w momencie rozpoznania i bez doustnych leków przeciwcukrzycowych nie będzie w stanie osiągnąć lub utrzymać prawie normoglikemii; znaczna część pacjentów będzie ostatecznie wymagać insulinoterapii w celu utrzymania długoterminowej kontroli glikemii, w monoterapii lub w połączeniu z doustną terapią przeciwcukrzycową. Uważa się, że częsta potrzeba eskalacji terapii odzwierciedla postępującą utratę funkcji komórek…
Metody monitorowania funkcjonalnych subproteomów inhibitorów proteazy SERPIN
Konformacyjne warianty unikalnej rodziny inhibitorów proteaz, określane jako SERPIN, są najczęściej niedostatecznie reprezentowane w analizach proteomicznych. Ogranicza to zrozumienie złożonej regulacji, jaką ta rodzina białek przedstawia sieciom w sieci interakcji proteaz. Używając separacji opartej na kulkach, zapewnianej przez rodzinę produktów wzbogacania proteomicznego, w szczególności AlbuVoid ™ i AlbuSorb, demonstrujemy ich użyteczność w badaniach nad SERPINami w surowicy . Sugerujemy również ich zastosowanie do opracowania profili funkcjonalnych proteoform SERPIN oraz sposobu, w jaki mogą one ustalić…
Struktura i funkcja telomerów
DNA telomerów – końcowych kompleksów DNA-białko chromosomów – różni się wyraźnie od innych sekwencji DNA zarówno pod względem struktury, jak i funkcji. Ostatnie prace zwróciły uwagę na jego niezwykły sposób syntezy przez rybonukleoproteinową odwrotną transkryptazę, telomerazę , a także na jego zdolność do tworzenia niezwykłych struktur in vitro. Ponadto wykazano, że synteza telomerów przez telomerazę ma zasadnicze znaczenie dla utrzymania telomerów i długoterminowej żywotności. Katalityczne homologi podjednostek telomerazy z rozszczepionych drożdży i człowieka. Katalityczne podjednostki białkowe telomerazy z orzęsków Euplotes aediculatus…
Metaboliczna zależność odkształcalności krwinek czerwonych.
Badano udział stanu metabolicznego ludzkich erytrocytów w utrzymaniu odkształcalności komórek podczas i po inkubacji in vitro w surowicy przez okres do 28 godzin. Początkowa utrata odkształcalności błony stała się widoczna między 4 a 6 godziną, gdy poziomy komórkowe trifosforanu adenozyny (ATP) wynosiły około 70% wartości początkowych. Odkształcalność błony pozostawała następnie stabilna między 6 a 10 godzinami. Po 10 godz., gdy komórkowe ATP spadło do < 15% wartości początkowych, postępujące równoległe zmiany w wapniu krwinek…
Czy choroby zębów są przykładami katastrof ekologicznych
Choroby zębów należą do najbardziej rozpowszechnionych i kosztownych chorób dotykających społeczeństwa uprzemysłowione, a mimo to można im bardzo zapobiegać. Mikroflora biofilmów płytki nazębnej z obszarów dotkniętych chorobą różni się od tej występującej w zdrowiu, chociaż domniemane patogeny często można wykryć w niewielkiej liczbie w normalnych miejscach. W przypadku próchnicy następuje przesunięcie w kierunku dominacji środowiskowej bakterii Gram-dodatnich i kwasogennych (np. mutans streptococci i lactobacilli) kosztem gatunków wrażliwych na kwasy związanych ze…
Ocena obróbki HemogloBind do przygotowania próbek do analizy cholinesterazy.
Acetylocholina jest niezbędnym neuroprzekaźnikiem występującym w całym układzie nerwowym. Jego działanie na receptory postsynaptyczne jest regulowane poprzez hydrolizę przez różne karboksyloesterazy, zwłaszcza cholinoesterazy (ChEs). Ostra toksyczność związków fosforoorganicznych (OP) jest bezpośrednio związana z ich działaniem jako inhibitorów ChE. Jednym szeroko stosowanym testem do oceny aktywności ChE jest metoda spektrofotometryczna opracowana przez Ellmana i in. Gdy źródło enzymu pochodzi z tkanek lub, w szczególności, krwi, hemoglobina wykazuje pik spektrofotometryczny przy tej samej długości fali stosowanej…